Attività insetticida e effetto di biocontrollo di Autogra pha californica multiplenucleopolyhedrovirus (AcMNPV) sulle larve di Spodoptera frugiperda

Astratto

Il verme dell'esercito autunnale, Spodoptera frugiperda, è uno dei parassiti più importanti del mais, che ha recentemente invaso la Cina. Per determinare l'effetto di controllo del Autographa californica nucleopoliedrovirus multiplo (AcMNPV) su larve di S.frugiperda, l'attività insetticida e l'effetto di biocontrollo di AcMNPV su S.frugiperda sono stati studiati e analizzati mediante metodi di saggio biologico e test di efficacia sul campo. I risultati hanno mostrato che la concentrazione letale mediana (LC₅₀)di AcMNPV agendo sul 2^ndlo stadio delle larve di S.Frugiperda era 2,9x 10⁷PIB/mL. L'efficacia media del controllo è pari a 10⁷Sospensione PIB/mL AcMNPV+Bt (1500 mL/hm²) su S.frugiperda è stato del 68,99% sul 10^thgiorno e 66,87% il 15^thgiorno dopo la somministrazione. Infine, il software DNAMAN 6.0 è stato utilizzato per identificare l'omologia del DNA degli insetti morti e i risultati hanno mostrato che le sequenze genetiche polh, lef-8 e lef-9 dell'insetto morto e di S．Frugiperda erano 100 % identici. Tutti i risultati sopra riportati potrebbero ulteriormente verificare che AcMNPV possa svolgere un ruolo chiave nel controllo di S．frugiperda．Si suggerisce che 10⁷PIB/mL AcMNPV＋Bt sospensione (1500 ml/hm²) dovrebbe essere applicato al culmine della comparsa delle giovani larve di S.frugiperda e dopo le 16:00-17:00 in una giornata soleggiata per evitare l'influenza della temperatura elevata e della luce, in modo che la preparazione del virus possa svolgere un ruolo migliore ruolo e migliorare il suo effetto di controllo su S.frugiperda．

Parole chiave: AcMNPV;Spodoptera frugiperda;peste dei lepidotteri;larvale;biopesticidi;AcMNPV＋Bt Sospensione;attività insetticida;prevenzione e controllo del verde

Lo Spodoptera frugiperda è un parassita migratore onnivoro che è entrato per la prima volta in Cina dal Myanmar nel 2019 e si è rapidamente diffuso in 1.518 distretti in 26 province e comuni della Cina, costituendo una seria minaccia per la sicurezza alimentare della Cina. Finora, nella strategia di controllo di Armyworm, il controllo dell’epidemia di lambrico dipende ancora dall’uso massiccio di pesticidi chimici.L’uso eccessivo di pesticidi chimici può facilmente causare resistenza ai parassiti, ricomparsa di residui ambientali e inquinamento.Una serie di gravi problemi hanno seriamente limitato lo sviluppo sostenibile dell’agricoltura moderna. Pertanto, l’uso di metodi di controllo biologico o di sostituzione dei biopesticidi.L'uso di pesticidi per controllare la lafigma sta diventando sempre più importante e ha ricevuto crescente attenzione.

Autographa californica nucleopoliedrovirus multiplo AcMNPV è un virus della poliedrosi nucleare incorporato multi-grano isolato dalla larva di Argyria erba medica. Può infettare in modo incrociato più di 30 tipi di parassiti lepidotteri come la falena della barbabietola, la falena del cavolo, l'Argyria argyra e la Calyptera teristoides. il tipo misto con Bt e altri insetticidi e virus nocivi non bersaglio come agenti sinergici ha un evidente effetto sinergico su molti parassiti Noctuidae e amplia ulteriormente lo spettro insetticida e migliora l'effetto insetticida.AcMNPV è un nuovo biopesticida del virus degli insetti sviluppato da Wuhan Unioasis Biological Technology Co., LTD.È una combinazione del virus della poliedrosi nucleare dell'Argiria erba medica e del potente sinergizzante del virus Bt.Con una buona attività insetticida, l'A è stato ampiamente applicato negli ortaggi, negli alberi da frutto, nel riso e in altri campi.In questo articolo, l'attività insetticida e l'effetto di biocontrollo del nucleopoliedrovirus multiplo di Autographa californica (AcMNPV) contro Spodoptera frugiperda sono stati rilevati e valutati mediante test di attività di laboratorio ed esperimenti sul campo, al fine di fornire supporto dati per l'ampia applicazione del virus della poliedrosi nucleare in il controllo biologico di Spodoptera frugiperda nel mais.Fornisce le basi teoriche per la registrazione e l'applicazione dell'agente di sospensione di AcMNPV più Bt nel controllo di Armyworm.

1.Materiali e metodi

1.1Testare virus e agenti biologici

Il virus testato era Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV). Il 20 maggio 2019, Spodoptera frugiperda è stato raccolto dal campo di mais nella città di Xiantao, provincia di Hubei, e il test di screening dell'infezione virale è stato condotto nel laboratorio di Wuhan Unioasis Biological Technology Co. , LTD.(In cui Autographa Californica multiplenucleopolyhedrovirus AcMNPV ha un'elevata attività infettiva contro Spodoptera frugiperda). Le larve di Spodoptera frugiperda sono state allevate per aumentare e propagarsi. Le larve morte infette dal virus sono state macinate con acqua, filtrate attraverso 3 strati di garza e il filtrato è stato centrifugato a 600 giri/min e 300 giri/min. Il microconteggio era 1,8 ×10¹⁰poliedri virulenti per ml (Polyhedralinclusionbody PIB), ovvero per ottenere un grado tecnico puro del virus della poliedrosi (1,8 x 10¹⁰PIB/mL), conservato a bassa temperatura e messo da parte.

L'agente biologico testato era la poliedrosi nucleare di Autographa california. Bacillus thuringiensis per AcNPV.Bt breve (1,0 × 107 PIB/mL).È sviluppato da Wuhan Unioasis Biological Technology Co., LTD e prodotto dalla sua controllata Wuhan Chuqiang Biological Technology Co., LTD.

1.2Prova gli insetti

L'insetto sperimentale era Spodoptera frugiperda.Il 20 luglio 2019, le larve di Spodoptera frugiperda sono state raccolte dal campo di mais estivo nel villaggio di Banqiao, città di Dachangzhen, contea di Tongshan, provincia di Hubei, e riportate al laboratorio dell'Istituto di ricerca per la protezione del suolo e dei fertilizzanti dell'Accademia di agricoltura di Hubei. Scienze.Foglie di mais fresche e tenere sono state alimentate a testa singola in piastre Petri di plastica usa e getta (diametro 8 cm, altezza 3 cm).Le condizioni di alimentazione indoor erano:(25±1) ℃ e umidità relativa 60%-70%, il fotoperiodo è 16L:8D.Dopo più generazioni di riproduzione, i blocchi di uova fresche e sterilizzate vengono conservati per l'uso.

1.3Attività di laboratorio di Autographa californica nucleopoliedrovirus multiplo (AcMNPV) contro spodoptera frugiperda

Sei gradienti di concentrazione, 1,0 ×10⁹, 1,0×10⁸, 1,0×10⁷, 1,0×10⁶, 1,0×10⁵, 1,0×10⁴sono stati progettati in questo esperimento. Innanzitutto, il TC di AcNPV è stato diluito a 1,0 × 10⁹PIB/mL, quindi diluito 10 volte per ottenere altri diluenti con concentrazioni diverse. L'esperimento è stato trattato con controllo in bianco. Sono stati eseguiti un totale di 7 processi, ciascuno dei quali ripetuto 3 volte.

È stato adottato il metodo di alimentazione dei segmenti fogliari, ovvero le foglie giovani di mais fresco (lunghezza 2 cm × larghezza 2 cm) sono state prima trattate con spray in sospensione virale, quindi sono state alimentate le larve e le singole teste sono state alimentate in piastre di Petri.Le strisce di alimentazione erano: temperatura (25±1)℃, fase-umidità (60% ~ 70%), fotoperiodo (16L:8D). Dopo aver mangiato le foglie di mais tossiche, è necessario aggiungere foglie di mais fresche non tossiche immediatamente.48 larve del secondo stadio di Armyworm sono state trattate ripetutamente. Parte di riferimento 9{9-11}, considerando i cambiamenti della proliferazione del virus nelle cellule e negli ospiti della famiglia delle falene, il numero di insetti morti a causa del virus e il numero totale di insetti morti è stato studiato a 7 e 10 giorni dopo l'infezione, ed è stato calcolato il tasso di mortalità ed è stata calcolata la LC50.

1.4Test sul campo sull'effetto di controllo di 10 milioni di sospensioni di AcMNPV.Bt sulle larve di vermi dell'esercito

Il test di efficacia sul campo è stato condotto nel campo di mais estivo del villaggio di Xiaoyuan, città di Chuangwang, contea di Tongshan, provincia di Hubei.Il terreno di prova è complessivamente di 1500 m^２, il tipo di terreno è calcico, il valore del pH è 6,8, il contenuto di sostanza organica è del 13,9% e la fertilità è da media ad alta. Il mais viene piantato tutto l'anno e la varietà di mais è Xiyu n. 3. Il 13 luglio ,2020, fertilizzante composto al 45% 750 kg//hm^２verrà applicato come fertilizzante di base e seminato.Dal 2019, in questo campo si è verificata una grave insorgenza di verme dell'autunno.

Un totale di 10 milioni di sospensioni AcMNPV.BT (1500 ml/hm²) e 15% di emamectina benzoato. Sospensione di indocarb (300 ml/ hm²), insetticida comunemente usato e controllo in bianco sono stati trattati con 3 trattamenti.Ogni trattamento è stato ripetuto 4 volte, per un totale di 12 appezzamenti sperimentali, ciascuno con una superficie di 100 m²²

Nel pomeriggio del 26 agosto 2020 (quando si verificano con frequenza le larve di Spodoptera frugiperda), spruzzare l'antiparassitario una volta alla sera.Viene utilizzato lo spray elettrico per zaino multifunzione del marchio Lebang 3WBJ-16DZ, con una pressione di esercizio di 0,40~0,60 MPa, un diametro dell'orifizio di 1 mm e una portata di 60~85 l/h.Il giorno dell'applicazione dei pesticidi è soleggiato, con una temperatura di 23-32℃.Condurre sondaggi il 1°, 3°, 5°, 7°, 10° e 15° giorno dopo l'applicazione.Durante l'indagine, da ciascun appezzamento sono stati prelevati 10 punti di campionamento casuali e in ciascun punto sono state monitorate in continuo 10 piante, per un totale di 100 piante.È stato registrato il numero di insetti vivi, morti, avvelenamenti e nemici naturali su ciascuna pianta di mais.La relativa formula di calcolo è la seguente;

Diminuzione del tasso di insetti =(numero di insetti vivi prima dell'applicazione - numero di insetti vivi dopo l'applicazione)/numero di insetti vivi prima dell'applicazione

Effetto di prevenzione e controllo=(Diminuzione del tasso di insetti nell'area di trattamento- Diminuzione del tasso di insetti nell'area di controllo)/(100- Diminuzione del tasso di insetti nell'area di controllo)*100%

1.5Identificazione molecolare dell'ACMNPV

1) Testare campioni di virus.Selezionare il liquore madre dell'ACMNPV per la determinazione dell'attività indoor (campione 1), il preparato biologico 10 milioni di ACMNPV.Bt SC (campione 2), i cadaveri di insetti infetti da virus dopo test di efficacia sul campo (campione 3) e le larve di seconda generazione di larve infette da cadaveri di insetti raccolti nel campione 3 (campione 4) come campioni di virus di prova, per verificare se AcMNPV nei 10 milioni di ACMNPV.Bt ha attività battericida contro le larve di vermi.

2) Estrazione del DNA.Prendere 1,0 ml di campione AcMNPV, aggiungere 99,0 ml di acqua distillata e agitare accuratamente per 1 minuto.Prendere 300μL di sospensione dopo l'oscillazione, aggiungere 100μL di soluzione di cracking alcalina, bagnomaria a 37 ℃ per 30 minuti.Aggiungere 200μL di tampone Tris·HCl e centrifugare a 10.000 giri/min per 8 minuti.Prendere il surnatante in una provetta da centrifuga, aggiungere 5μL di proteasi K e 60μL di SDS, bagnomaria a 65 ℃ per 2 ore, rimuovere e raffreddare a temperatura ambiente.Aggiungere 650μL di fenolo saturo Mix L Tris, centrifugare a 10.000 giri/min per 5 minuti e trasferire il surnatante in una nuova provetta da centrifuga.Aggiungere 650μL di liquido misto di fenolo e cloroformio (rapporto volumetrico 1:1), centrifugare a 10.000 giri/min per 5 minuti, quindi trasferire il surnatante in una nuova provetta da centrifuga.Aggiungere 650μL di liquido misto di cloroformio e alcol isoamilico (rapporto volumetrico 24:1), centrifugare a 10.000 giri/min per 5 minuti e infine trasferire il surnatante in una nuova provetta da centrifuga.Misurare la concentrazione del DNA utilizzando uno spettrofotometro.

3) Amplificazione mediante PCR.Utilizzando il sistema standard T3 super mix: campione di DNA 2 μ L. primer da 0,5 μL per il prima e il dopo, super mix T3 18 μL e ddH₂O7 μL.La condizione di amplificazione della PCR è di 95 ℃.Dopo 3 minuti di pre-denaturazione, vengono eseguiti i seguenti cicli: 98 ℃ per 15 secondi, 52 ℃ per 20 secondi, 72 ℃ per 20 secondi e infine 72 ℃ per 5 minuti, per un totale di 42 cicli.

4) Elettroforesi su gel di agarosio del DNA.Prendere il prodotto di amplificazione PCR da 2μL e 5 kb di DNA Marker e inserirlo nel gel di agarosio ed eseguire l'elettroforesi a 180 V per 20 minuti.Dopo l'elettroforesi, osservare i prodotti della PCR nel sistema di imaging del gel.

Polh primer a monte:

AGGGTTTCCCAGTCACGGGGCTGAG-GATCCTTT

Polh primer a valle:

GAGCGGATAATTTCACACTGGTGTGTG-CAAACTCCTT

Primer a monte Lef-8:

AGGGTTTCCCAGTCCACGCACGGGAAAT-GAC

Primer a valle Lef-8:

GAGCGGATAATTTCACATTGTACGGATCTTTCGGC

Primer a monte Lef-9

AGGGTTTCCCAGTCACGAAACGGGTACGCGG

Primer a valle Lef-9:

GAGCGGATAATTTCACATTGTCACCGTCAGTC

Infine, applicare il software DNAMAN6.0 per confrontare le sequenze polh, lef-8 e lef-9 misurate.

1.6Analisi ed elaborazione dei dati

I dati sperimentali sono stati elaborati utilizzando il software di analisi statistica dei dati IBM SPSS 22.0.

Nell'esperimento di determinazione dell'attività insetticida del virus, viene contato il numero di insetti vivi e morti trattati con ciascuna concentrazione, quindi vengono calcolati il ​​tasso di mortalità e la percentuale di morti corretta e convertiti in valori di probabilità.La concentrazione di ciascun trattamento viene convertita in valori lg.L'equazione di regressione della virulenza (pendenza ± SE) viene calcolata attraverso valori e pesi di probabilità di lavoro e LC₅₀Valore e il suo limite di confidenza al 95%, quindi esegui il test chi quadrato (²).Nell'esperimento sull'effetto di controllo sul campo, è stato contato il numero di insetti vivi in ​​ciascun trattamento ed è stato calcolato il tasso di riduzione dei parassiti.L'effetto di controllo è stato calcolato utilizzando la formula di modifica di Microsoft Excel.Per l'analisi è stato utilizzato il metodo di Duncan e l'ANOVA unidirezionale è stata utilizzata per confrontare le differenze significative tra i trattamenti,

I grafici nel testo sono stati tutti creati utilizzando il software Microsoft Excel.

2.Risultati e analisi

2.1Attività insetticida di AcMNPV contro le larve di Spodoptera frugiperda

I risultati dei test sull'attività indoor (Tabella 1) mostrano che dopo 7 giorni di trattamento, il LC₅₀di AcMNPV agisce sulle larve del 2° stadio degli Spodoptera frugiperda è 4,1x10⁷PIB/mL e LC₉₀è 1,05×10⁸PIB/mL.Dopo 10 giorni di trattamento, la LC₅₀di AcMNPV agisce sulle larve del 2° stadio è 2,9x10,5⁷PIB/mL e LC₉₀è 7,8x10⁷PIB/mL.La LC₅₀e LC₉₀Gli effetti di AcMNPV sulle larve di 2° stadio di Fall Armyworm dopo 7 giorni di trattamento erano entrambi superiori a 10 giorni, indicando che AcMNPV mostrava una buona attività insetticida contro le larve di Spodoptera frugiperda a 7 giorni.

2.2 Effetto di controllo del campo di AcMNPV.Bt agisce sulle larve di Spodoptera frugiperda

I risultati degli studi di efficacia sul campo hanno mostrato che 10 milioni di AcMNPV.Bt SC (1500 ml/hm²) ha avuto un effetto relativamente lento sulle larve di spodoptera frugiperda.L'effetto medio di controllo al 1°, 3° e 5° giorno dopo la spruzzatura è stato rispettivamente dell'11,57%, 16,23% e 15,56%.L'effetto di controllo medio il 7° giorno dopo l'irrorazione è stato solo del 21,88%.Tuttavia, il 10° giorno dopo l'irrorazione, l'effetto di controllo degli insetti è aumentato improvvisamente al 68,99%, e anche l'effetto di controllo medio al 15° giorno dopo l'irrorazione è stato del 66,87%.Tuttavia, rispetto agli agenti chimici Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb 15% (300mL/hm²), ha avuto un buon effetto letale sulle larve di spodoptera frugiperda, riducendo rapidamente il numero della popolazione di insetti.L'effetto medio di controllo al 1°, 3°, 5° e 7° giorno dopo il trattamento è stato rispettivamente del 91,39%, 92,66%, 90,71% e 87,19%.Tuttavia, l'effetto medio di controllo al 10° giorno ha cominciato a diminuire, raggiungendo solo il 67,63%, mentre l'effetto di controllo medio al 15° giorno è sceso al 51,60%.Vedere la Tabella 2 per i dettagli.

Allo stesso tempo, abbiamo anche scoperto che il tasso di diminuzione degli insetti nell’area di controllo era negativo al 1°, 3° e 5° giorno dopo il trattamento, indicando un aumento del numero di insetti.Il 7° giorno dopo il trattamento cominciò a diventare positivo (la popolazione degli insetti cominciò a diminuire).Il tasso medio di diminuzione degli insetti al decimo e quindicesimo giorno è stato rispettivamente del 38,25% e del 47,00%, il che è molto probabilmente correlato al fatto che alcune larve di spodoptera frugiperda hanno iniziato a impuparsi nel terreno e le generazioni si sono sovrapposte dopo 10-15 giorni. .

In sintesi, si può vedere che i 10 milioni di AcMNPV.Bt SC (1500 ml/hm²) ha un certo effetto di controllo sugli spodotteri frugiperda, ma il suo effetto è lento e la sua efficacia è di circa 10-15 giorni dopo l'applicazione.

2.3 Effetti di AcMNPV.Bt sui nemici naturali

Durante gli esperimenti sul campo, gli effetti di 10 milioni di AcMNPV.Sono stati studiati anche la sospensione del Bt sui nemici naturali dei parassiti del mais, come ragni, coccinelle e scarafaggi.I risultati hanno mostrato che 10 milioni di AcMNPV.La sospensione Bt non ha causato danni significativi ai nemici naturali come ragni, coccinelle e scarafaggi, con una media di 13,4 nemici naturali ogni 100 piante.Tuttavia, gli agenti chimici Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb 15% sospensione hanno avuto un effetto tossico significativo sui nemici naturali come ragni, coccinelle e scarafaggi.Il primo giorno dopo il trattamento, il numero medio di nemici naturali su 100 piante di mais era solo 3,1, mentre il terzo giorno dopo il trattamento sono stati riscontrati solo 5,2 nemici naturali di vario tipo (Figura 1).Si può vedere che i 10 milioni di AcMNPV.La sospensione Bt ha un buon effetto protettivo sui nemici naturali dei parassiti, mentre la sospensione Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb 15% provoca danni relativamente maggiori ai nemici naturali.

2.4 Identificazione molecolare di AcMNPV

I risultati dell'amplificazione PCR di diversi campioni di test hanno mostrato che i frammenti di amplificazione di polh, lef-8 e lef-9 dei campioni 1, 2, 3 e 4 erano coerenti e di dimensioni corrette.I prodotti PCR dei geni polh, lef-8 e lef-9 erano rispettivamente 0,54, 0,716 e 0,29 kb (Figura 2), il che dimostra che AcMNPV ha attività insetticida contro le larve di spodoptera frugiperda.

Infine, il software DNAMAN 6.0 è stato utilizzato per eseguire l'allineamento della sequenza sui frammenti amplificati di polh, lef-8 e le.f-9 nei campioni 1, 2, 3 e 4 (Figura 3).I risultati hanno mostrato che la somiglianza tra le sequenze amplificate di polh, lef-8 e lef-9 nei campioni 1, 2, 3 e 4 era del 100%, indicando che i campioni 1, 2, 3 e 4 provengono tutti dal stesso virus AcMNPV.

3. Discussione

AcMNPV è un virus a forma di bastoncino che infetta il corpo degli insetti attraverso l'alimentazione.Il virus prolifera e si diffonde in tutto il corpo dell'insetto, infettando gradualmente l'intero corpo e portando infine alla morte.I risultati di questo studio indicano che AcMNPV ha una buona attività biologica contro le larve di Spodoptera frugiperda.Il suo LC al 7° e al 10° giorno era rispettivamente di 4,1x107 e 2,9x107PIB/m2 e ha mostrato buoni effetti di controllo sul campo.La sospensione mista di 10 milioni di AcMNPV.Bt (1500 mL/hm²) ha avuto buoni effetti di controllo medio al 10° e 15° giorno dopo il trattamento, raggiungendo rispettivamente il 68,99% e il 66,87%, ed è risultato sicuro contro i nemici naturali.Pertanto, il ritmo di ricerca e sviluppo dovrebbe essere accelerato in modo che AcMNPV possa svolgere un ruolo maggiore nel controllo biologico di Spodoptera frugiperda.La sospensione da 10 milioni di AcMNPV.Bt prodotta da Wuhan Chuqiang Biotechnology Co., Ltd. è un composto di AcMNPV e del biopesticida Bacillus thuringiensis (Bt), che può migliorare significativamente l'attività insetticida del virus.Poiché il Bt è un insetticida ad ampio spettro con una buona attività insetticida microbica, quando AcMNPV è combinato con Bt, la sua tossicità dovrebbe essere significativamente migliorata rispetto a una singola formulazione.Ciò non solo espande la gamma insetticida del Bt, ma ne aumenta anche la tossicità, raggiungendo l’obiettivo di utilizzare un’unica formulazione per controllare più parassiti.Questo è anche il motivo per cui la sospensione di 10 milioni di AcMNPV.Bt può essere ampiamente promossa negli ortaggi, negli alberi da frutta e nel riso.Pertanto, 10 milioni di AcMNPV.Bt possono essere promossi come agente di controllo verde per lo Spodoptera frugiperda nel mais

In questo studio, durante l'esecuzione di test di efficacia sul campo, nel caso di un rapido declino della popolazione di insetti nell'area di controllo (il tasso di diminuzione degli insetti al quindicesimo giorno ha raggiunto il 47,00%), l'effetto di controllo medio di 10 milioni di AcMNPV.Bt sospensione (1500 ml/hm²) il 15° giorno dopo il trattamento era del 66,87%, mostrando una rapida tendenza al rialzo.Mentre l'effetto di controllo medio del pesticida chimico 15% metossazolo · indefencarb SC (300 mL/hm²) il 15° giorno dopo il trattamento è sceso al 51,60%.Sebbene si possa vedere che la sospensione di 10 milioni di AcMNPV.Bt (1500 mL/hm²) ha un certo effetto di controllo su Spodoptera frugiperda dal 10° al 15° giorno, considerando la lenta efficacia dei pesticidi biologici e la breve durata di vita e le generazioni sovrapposte delle larve di Spodoptera frugiperda, si raccomanda di aumentare il numero di indagini e prolungare il tempo di indagine quando condurre prove di efficacia sul campo di pesticidi biologici (in particolare preparati virali), che potrebbero ottenere risultati sperimentali più ideali.Anche questo è un limite di questo studio.In sintesi, rispetto agli agenti biologici, gli agenti chimici hanno un effetto di uccisione relativamente più elevato sui parassiti e agiscono rapidamente.Possono essere utilizzati come misura di prevenzione e controllo di emergenza durante le epidemie di parassiti.Quando i danni causati dai parassiti si verificano in modo relativamente leggero, i pesticidi biologici possono sostituire i pesticidi chimici come una delle misure di prevenzione e controllo verdi, riducendo così l’inquinamento ambientale e ottenendo l’effetto di proteggere l’ecologia agricola.

Inoltre, il gene Polh (poliedrina) utilizzato in questo studio è un tipo di promotore proteico poliedrico, esso e P10 sono il promotore più comunemente utilizzato nel sistema del vettore di espressione del baculovirus (BEVS), entrambi altamente espressi nella fase avanzata di infezione virale^[13].Tuttavia, l'attività del promotore p10 è inferiore a quella del promotore polh, quindi il promotore polh viene spesso utilizzato per l'espressione di proteine ​​esogene.Il gene lef-8 può codificare la subunità più grande della RNA polimerasi del virus ed è un tipo di fattore di espressione tardiva^[14].lef-9 è un tipo di fattore di espressione tardiva che codifica la subunità del complesso proteico con lef-4, lef-8 e p47 nei baculovirus.La ricerca ha scoperto che i virus privi del gene lef-9 non possono generare particelle virali con attività infettiva, mentre i virus con il gene lef-9 possono ripristinare l'attività infettiva del virus ripristinandola.Pertanto, il gene lef-9 è un gene essenziale affinché il baculovirus formi BV (Budded Virus) con attività infettiva^[15].Si può vedere che i geni lef-8 e lef-9 hanno un elevato conservatorismo in diversi tipi di virus della poliedrosi nucleare, quindi i geni lef-8 e lef-9 possono essere utilizzati come base per identificare i tipi di virus.Pertanto, questo studio ha utilizzato polh, lef-8 e lef-9 come oggetti di rilevamento e, attraverso l'allineamento della sequenza genetica, l'omologia era elevata, raggiungendo tutti il ​​100%.Il metodo di rilevamento molecolare rapido ha verificato ancora una volta che AcMNPV ha una buona attività insetticida contro Spodoptera frugiperda, che è adatta per un'ulteriore promozione e applicazione nella prevenzione e nel controllo di Spodoptera frugiperda.

Dal 2019, lo Spodoptera frugiperda ha invaso la Cina ed è diventato un importante parassita del mais.Ha formato una popolazione stanziale in alcune aree della Cina meridionale e sudoccidentale, causando enormi perdite all’industria cinese del mais e minacciando seriamente la sicurezza alimentare del Paese.^[16].Di fronte all’attuale grave situazione di prevenzione e controllo dello Spodoptera frugiperda in Cina, è urgente accelerare lo screening e lo sviluppo di pesticidi efficaci per la prevenzione e il controllo dello Spodoptera frugiperda^[17].Sebbene gli insetticidi virali abbiano limitato la loro diffusione a causa della loro lenta velocità d’azione e dello stretto spettro insetticida, nel contesto di una crescente attenzione all’ecologia e alla protezione ambientale, si prevede che gli insetticidi baculovirus saranno sempre più ampiamente utilizzati nella produzione agricola a causa dei loro vantaggi significativi rispetto agli insetticidi virali. pesticidi tradizionali.A causa della sensibilità dei preparati virali degli insetti alle condizioni esterne come l'alta temperatura, la luce solare, la pioggia e l'età dei parassiti[18].Pertanto, si consiglia di applicare pesticidi durante il periodo di punta della comparsa delle larve dei parassiti.È meglio utilizzarlo dopo le 16:00-17:00 nelle giornate soleggiate per evitare l'impatto di condizioni ambientali avverse come alta temperatura e luce, in modo che la formulazione del virus possa svolgere meglio il suo ruolo e migliorare l'effetto di controllo sui parassiti .